Морфологические изменения нейронов в гиппокампе крыс при преждевременном старении

Abstract

Цель исследования – проанализировать состояние нейронов гиппокампа преждевременно стареющих крыс линии OXYS в возрасте, когда признаки ускоренного старения мозга отсутствуют (возраст 14 дней), в период их активной манифестации (возраст 5 мес.) и активной прогрессии (15 мес.). Исследования выполнены на 15 крысах OXYS и 15 крысах Вистар (контроль). Материалом исследования служил головной мозг крыс, изъятый сразу после проведения прижизненной транскардиальной перфузии 10%-м раствором формалина на фосфатном буфере (рН 7,4). С помощью санного микротома готовили фронтальные срезы головного мозга толщиной 5 мкм. Для выявления хроматофильного вещества в перикарионах нейронов гиппокампа срезы окрашивали 0,1%-м крезиловым фиолетовым по Нисслю. При световом микроскопировании СА1, СА3, зубчатой извилины гиппокампа подсчитывали нейроны с очаговым, тотальным хроматолизом, гиперхромные сморщенные нейроны, гиперхромные без сморщивания. На снимках, полученных при помощи программы Carl Zeiss Axio Vision 8.0 при увеличении 10  100, определяли среднюю площадь (мкм2) тел и ядер нейронов. Методами световой микроскопии выявлены существенные структурные изменения нейронов в СА1, СА3, зубчатой извилине гиппокампа, свидетельствующие о наличии у крыс OXYS характерных для стареющего мозга признаков нейродегенерации уже в возрасте 5 мес. Наиболее выраженные морфологические изменения развиваются в регионе СА1 гиппокампа крыс OXYS и носят необратимый характер. К возрасту 15 мес. доля дегенеративно измененных нейронов растет. Морфометрический анализ средней площади тел и ядер нейронов гиппокампа крыс обеих линий в возрасте 14 дней не выявил существенных межлинейных различий. В возрасте 5 мес. в регионе СА1 гиппокампа крыс OXYS определялась достоверно меньшая средняя площадь тел и ядер пирамидных нейронов, чем у крыс Вистар. С возрастом такие изменения прогрессировали, и у 15-месячных крыс OXYS значительное уменьшение площади тел и ядер было обнаружено во всех исследуемых регионах гиппокампа по сравнению с показателями у крыс Вистар. Полученные результаты подтверждают перспективность использования крыс OXYS в качестве модели ускоренного старения мозга.

The aim of this work was the analysis of structural changes with age in the hippocampus of senescenceaccelerated OXYS rats when signs of accelerated brain aging are missing (age 14 days), developments (age 5 months), and active progresses (age 15 months). The study was performed on 15 OXYS rats and 15 Wistar rats (as a control). After dislocation, brains were dissected, fixed with 10% formalin, embedded in paraffin, and serially cut in coronal sections (5μm thickness). These sections were stained with Cresyl violet and examined with a photomicroscope (Carl Zeiss Axiostar plus, Germany). The total number of hippocampal pyramidal cells in the CA1, CA3 and the dentate gyrus regions were estimated in 14-dayold, 5- and 15-month-old OXYS and Wistar rats (n = 5) on the 5 slices of each brain sections. The number of neurons with chromatolysis, hyperchromatic with darkly stained cytoplasm and shrunken neurons were calculated as degenerative neurons. The pictures obtained with the program Carl Zeiss Axio Vision 8.0 with increasing 10  100, determined the average area bodies and nuclei of neurons (mkm2). The significant structural changes of neurons in the CA1, CA3 and dentate gyrus regions of the hippocampus in OXYS rats at 5 month of age are revealed by light microscopy. This results indicates the early develop neurodegeneration in OXYS rats. The most pronounced morphological changes occur in the CA1 region of the hippocampus of OXYS rats and irreversible. The degenerative changes of neurons in the hippocampus increases by the age of 15 months. Morphometric analysis of the average area of bodies and the nuclei of hippocampal neurons in CA1, CA3 and the dentate gyrus regions of OXYS and Wistar rats at 14 days of age showed no significant interline differences. At 5 months of age in the CA1 region of the hippocampus of OXYS rats was determined a significantly lower average body size and nuclei of pyramidal neurons compared with Wistar rats. With age, these changes have progressed and 15-month-old OXYS rats have a significant decrease in the area bodies and nuclei in all studied regions of the hippocampus compared with Wistar rats. These results confirm the promising use OXYS rats as a model of accelerated brain.